リューコストラットCDx FLT3 変異検査^®

Product Details

• Summary and Explanation of the Test

  リューコストラットCDx FLT3 変異検査は、日本国内でギルテリチニブフマル酸塩およびキザルチニブ塩酸塩の両方のコンパニオン診断薬として使用されます。このアッセイはPMDAの承認を受けており、新たに診断されたFLT3変異AML患者や再発/難治性のFLT3 変異AML患者に対して、医療従事者が最適な治療法を特定するための重要なツールとなります。

  このアッセイは、LabPMM合同会社によって最初にサービスとして提供され、現在はキットとして購入することができます。この体外診断用試薬キットには、データの解釈、変異型/野生型シグナル比の生成、およびギルテリチニブおよびキザルチニブへの適用予測を行うソフトウェアと共に、試薬が含まれています。定義されたワークフローにより、このアッセイは簡単に実施でき、検査室での迅速なFLT3検査の実施に適しています。

  このアッセイは、FLT3遺伝子の領域を標的としており、ITD およびTKD の変異（D835およびI836）を特定します。DNAはPCRによって増幅され、増幅産物はキャピラリー電気泳動によって検出されます。FLT3変異の状態はリューコストラットCDx FLT3ソフトウェアによって判定されます。受け入れ可能な患者検体は、EDTAまたはヘパリンナトリウム採血管に保存された末梢血または骨髄穿刺液となります。

• Principles of the Procedure

  FLT3 の内部縦列重複（ITD）変異

  長さの変異ともいわれるFLT3の ITD変異 は、FLT3遺伝子の膜近傍（JM）領域の内部および周辺領域を含む、 FLT3遺伝子の一部分の重複と挿入によって起こります。これらの変異は、挿入されたDNAの重複配列の位置および長さによるため多様です。 ITD変異は、FLT3の恒常的な自己リン酸化および活性化をもたらします。

  リューコストラットCDx FLT3 変異検査では、JM領域の内部および周辺領域に位置させたプライマーを使用します。検体のシグナルが確認できるよう蛍光色素を用いて、順方向と逆方向のPCRプライマーを蛍光標識しています。本アッセイの測定によれば、野生型FLT3アレルでは327±１ bpの産物が増幅されますが、ITD変異が含まれるアレルでは産物の長さが327±1 bpを超えます（図１）。

  FLT3のチロシンキナーゼドメイン（TKD）変異

  FLT3 TKD 変異は、核酸コドン配列の置換や欠失によって、高度に保存された触媒中心のアミノ酸配列の変化を惹起します。D835およびI836 に見られる置換および欠失のようなTKD変異により、FLT3の恒常的な自己リン酸化および活性化がもたらされます。

  リューコストラットCDx FLT3 変異検査では、TKD領域の両端を標的としたプライマーを使用します。
  FLT3の標的領域をPCRによって増幅した後、EcoRV制限酵素による消化を行います。
  本アッセイの測定によれば、145±１ bpまたは147±１ bp である最初の未消化増幅産物から得られたFLT3遺伝子の野生型アレルの消化産物は79±1 bpですが、変異型アレルでは125±1 bp または127±1 bpになります（図１）。